狗狗过敏源测试流程
狗狗过敏源测试是一个重要的过程,可以帮助主人了解狗狗对何种物质过敏,从而采取相应的预防措施。以下是根据提供的搜索结果,关于狗狗过敏源测试的一般流程:
1. 准备工作
在进行过敏源测试之前,需要确保收集足够的标本。根据搜索结果,常用的标本包括血液、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清和组织标本。采集标本后应尽可能早地进行提取,并在提取后尽快进行实验。如果不能立即进行实验,应将标本置于-20℃保存,避免反复冻融。需要注意的是,不能检测含NaN3的样品,因为NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
2. 实验步骤
2.1 设置标准品孔和样本孔
在酶标包被板上设置标准品孔和样本孔。标准品孔各加不同浓度的标准品50μL,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样时应使用加样器,并尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2.2 加酶和温育
每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外。温育时需要用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
2.3 洗涤
洗涤时小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
2.4 显色和终止
显色时每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。终止时每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
2.5 测定
以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
3. 注意事项
- 标准品从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
- 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
- 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。
- 一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
- 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。
- 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
- 底物请避光保存。
- 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
- 所有样品、洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
- 本试剂不同批号组分不得混用。
- 如与英文说明书有异,请以英文说明书为准。
以上步骤和注意事项提供了进行狗狗过敏源测试的基本框架。然而,实际操作时应遵循具体试剂盒的说明书,并在专业人员指导下进行。此外,由于过敏源测试可能存在一定的误差,因此测试结果应由专业人员解读,并结合临床症状综合判断。